Étape 6: Test mis en place
Préparer les normes par aliquotage la plus faible concentration d’ADN pour éviter toute contamination. Commencez par 11 standard et puis fermez le couvercle.
1 25ul 2.0ng /ul standard + 75ul 1 X TE
2 20ul 2.0ng / ul standard + 80ul 1 X TE
3 15ul 2.0ng / ul standard + 85ul 1 X TE
4 10ul 2.0ng / ul standard + 90ul 1 X TE
5 5ul 2.0ng / ul standard + 95ul 1 X TE
3ul 6 2.0ng / ul standard + 97ul 1 X TE
7 1ul 2.0ng / ul standard + 99ul 1 X TE
8 0.5µl 2.0ng / ul standard + 99.5ul 1 X TE
9 1ul 0,2 ng/ul standard + 99ul 1 X TE
10 0.5µl 0.2ng / ul standard + 99.5ul 1 X TE
100ul 11 1 X TE
Échantillon, mis en place
La concentration la plus élevée que peut lire la flurometer est 0.2ug. Si l’ADN est connu pour être supérieur à 0.2ug, effectuer des dilutions nécessaires pour obtenir une concentration d’ADN de moins de 0.2ug. Toujours effectuer au moins un 01:20 dilution des échantillons ADN . Si vous travaillez avec l’ADN fortement concentrée (500ng/ul), une dilution de 1: 200 devrait être bon.
1. ajouter 95ul de 1 tampon X TE à tous les tubes à échantillon (y compris son tube double/triple).
2. tubes de 1 X TE Add 5ul de l’échantillon d’ADN dilué à la 95ul. Pipeter tube pipette après chaque aliquote d’ADN (figure 1). Il devrait y avoir un volume total de 100ul à ce stade.
3. éteindre la lumière de la hotte moléculaire
4. saisir le picogreen
6. à l’aide de la pipette de réactif de 1000ul, ajouter 8520ul de 1 x tampon TE dans chaque tube de Picogreen
7. vortex brièvement tous les tubes Picogreen pour mélanger
8. centrifuger si possible, les tubes de picogreen
9. 100ul aliquote de Picogreen (avec une nouvelle pipette pour chaque aliquote) à tous les 161 tubes (figure 2) commençant par la norme la plus basse (100ul 1 X TE). Plafonner les tubes après chaque aliquote de picogreen.
a. le tube de Picogreen devrait contenir suffisamment Picogreen pour 42 échantillons ; vider le tube.
10. prenez un autre tube Picogreen et répétez l’étape 9 jusqu'à ce que tous les échantillons d’ADN dont les normes ont reçu 100ul de picogreen
