Étape 5: Test de toxicité (laboratoire aplications)
Préparation des substances d’essai
-Hydrophile : Poids de la substance, se désintégrer avec un mortier ou un stomacher et diluer dans une solution saline.
-Hydrophobes : Poids de la substance, s’est désintégrée avec un mortier ou un stomacher et le diluer dans un solvant organique (éthanol). Ajouter 10 ul d’échantillon dans un disque de papier. Sec pendant 24 h (ou au four) pour éliminer l’éthanol.
Inhibition de la bioluminescence en inhibant la chaîne respiratoire.
-Ajuster la concentration d’une culture de Vibrio fischeri, à une concentration approximative de 108 UFC / mL (correspondant à environ 0,5 McFarland turbidité).
-Plantation de Vibrio fischeri dans une assiette salée de TSA (2 % NaCl) à l’aide d’un coton-tige ou une spatule Digralsky.
-Incuber la plaque à 22 ° C pendant 24 h.
-Une fois les bactéries cultivées, déposé l’AMT plaque 10 de la substance d’essai à la concentration désirée. Attendez 15 minutes jusqu'à ce que la goutte sèche.
-Observer la diminution de bioluminescence dans la zone touchée par la baisse de la substance d’essai dans des conditions d’obscurité.