Étape 3: PCR amplification
Avec des amorces appropriées, vous pouvez amplifier votre séquence de choix. Si vous avez réussi à mettre la main sur certains Arabidopsis thaliana alors ce qui suit devrait fonctionner pour amplifier la loi2 (At3g18780 http://www.arabidopsis.org/servlets/TairObject?accession=locus:2093954 ) qui sera un beau témoin positif, ils ont été conçus par mon ami John Hamilton de l’Université de Durham.
Vers l’avant
5' GGATCGGTGGTTCCATTCTTGC
Marche arrière
5' AGAGTTTGTCACACACAAGTGCA
Ils fonctionnent bien avec une température de recuit de 56 à 58 C. S’ils s’étendent un intron donc génomique donnera 342bp produit, mais si vous les utilisez pour la rt-PCR puis cDNA donnera 256bp.
L’image est un gel d’agarose d’une PCR, l’ADN est ajouté aux puits et un coups courant électrique à travers le gel, petit peu peut bouger à travers plus vite donc aller plus loin. Sur la gauche est un marqueur de poids moléculaire fait du phage digéré l’ADN, les bandes sont connus tailles peuvent donc être utilisés pour juger de la taille de nos produits PCR. Bromure d’éthidium a été ajouté au gel pour l’ADN peut être visualisée avec UV.
