GFP :
La protéine fluorescente verte (GFP) est une protéine qui présente une fluorescence verte vif lorsqu’ils sont exposés à la bleue à la lumière ultraviolette. GFP a été isolé de la méduse Aequorea Victoria par le scientifique japonais Osamu Shimomura (il a remporté le prix Nobel de chimie en 2008 pour la découverte et le développement de GFP) en 1961. GFP a été employé couramment dans l’étiquetage les organismes à des fins d’identification. Lorsque la GFP est expédiée à l’intérieur de la cellule, la cellule sera fluorescence sous fluoroscopie. Dans ce instructable j’utiliserai Josianne GFP.
Transfection :
Transfection est le processus consistant à mettre des acides nucléiques dans des cellules de bloquer ou d’exprimer certaines fonctions de la cellule. Transfection peut être divisée en base chimique transfection (Lipofectamine 2000 par Life Technologies est le plus commun), transfection non chimiques (électroporation est la façon la plus courante) et axée sur les particules de transfection tels que magnétofection. Il est très difficile à transfecter complètement polarisées ou complètement différenciées des cellules à l’aide de la méthode axée sur les produits chimiques. Trasnfection base chimique et axée sur les particules de transfection introduira trucs supplémentaires (tels que les lipides, les polymères et les nanoparticules magnétiques) Outre les acides nucléiques recherchés dans les cellules au cours de la transfection, et ces étoffes supplémentaires pourraient créer des résultats non souhaités ou inattendus après la transfection. Dans electrodeporation, la membrane de la cellule s’ouvrira beaucoup de trous minuscules sous la force de l’électrode, et acides nucléiques peuvent entrer dans la cellule par l’intermédiaire de ces trous. Électroporation traditionnelle s’applique une tension très élevée (plusieurs centaines de milliers de volts) en suspension cellulaire. Il tue beaucoup de cellules, et pour les cellules adhérentes, leurs caractéristiques sont différentes en suspension cellulaire et dans la couche de cellules. Pour les cellules adhérentes, transfection in situe donnera le meilleur résultat étant donné que les cellules sont en état de postmeitotic physiologiquement pertinents. Dans ce instructable que je sera transfecter entièrement G MDCK (Madin-Darby Canine Kidney cellules) des cellules différenciées in situs à l’aide du système d’électroporation appelé iPorator par primax biosciences. Cette machine utilise un petit courant au lieu d’une haute tension au cours de la transfection à réduire les dommages cellulaires. Au cours de la transfection, les cellules sont développent sur l’insert membrane poreuse (aucune remise en suspension requis). Ce système est le meilleur pour les cellules adhérentes. Cependant, ce système ne fonctionne pas pour les cellules en suspension.