Étape 3: Ajout d’un antibiotique
Nous ajoutons des antibiotique pour s’assurer que seules nos bactéries avec notre gène d’intérêt (IGE) sont présents dans la culture. Ceci est fait en utilisant un antibiotique qui nos bactéries résiste à puisque nous avons un gène protecteur qui est juste à côté de notre gouvernement de l’Inde. Par conséquent, nous ajouter un peu de nos antibiotiques, kanamycine, une partie aliquote de 50 mL. Les étapes sont énoncées ci-dessous, et il est important de rester à proximité de la flamme pour maintenir un environnement stérile. La flamme crée un flux d’air vers le haut et milieu chauffé pour empêcher les bactéries de pénétrer dans des bouillon LB. Utiliser la vidéo pour référence en suivant les étapes suivantes :
- pour allumer le brûleur Bunsen dans un espace ouvert sur votre banc de laboratoire
- avant de desserrer le bouchon sur le tube conique de 50 mL
- retirer le capuchon de la bouteille de mL 500 LB ; ne pas mettre sur le banc de laboratoire et il garder le visage vers le bas
- « flamme » la lèvre en le plaçant légèrement près de la flamme
- Placez la bouteille vers le bas près de la flamme tout en maintenant le cap
- aspirer à bouillon en utilisant une pipette
- remettre le bouchon sur la bouteille LB
- ramasser le tube à fond conique et dévisser et enlever le bouchon d’une main (l’aide de la pipette doit être dans l’autre main)
- la flamme légèrement cette lèvre (attention à ne pas se brûler ou fondre n’importe quoi)
- Ajouter dans le bouillon et remettre le bouchon sur le tube
- Répétez autant de fois que nécessaire pour ajouter 50 mL, en veillant à rester près de la flamme
- maintenant, ajoutez 5 microlitres de kanamycine (mon kanamycine est à 50 mg/mL pour commencer donc ce montant vous ajoutez peut changer selon votre concentration initiale) à l’aliquote LB de la même façon que lorsque aliquotage le bouillon (vous n’avez pas besoin à la flamme de la kanamycine, cependant)
- Cap et mix ou vortex la solution