Conception, assemblage et vérification d’une Nanostructure de Origami ADN 2D (6 / 9 étapes)

Étape 6: Assemblée

Une fois que tous les produits chimiques et l’ADN est arrivé et la stoechiométrie est complete, il était temps pour assembler les nanostructures. Nous avons utilisé les méthodes suivantes.

Méthodes

1. Créer 1 X tampon Ajouter 20 μl de 10 tampons de X 1,5 ml tube
2. Remettre en suspension les agrafes Ajouter 625 μl d’eau à chaque aliment de base en plaque 96 puits
3. Agrafes de piscine Ajouter 1 μl / agrafe à tube 1,5 ml.
4. Échafaudage de piscine Ajouter 40 μl échafaudage à tube 1,5 ml
5. Ajouter de l’eau Ajouter 17 uL eau à tube 1,5 ml.
6. Ajouter MgCl Ajouter 12 μl de MgCl
7. Thermocycle Recuire de 95 ° C à 20 ° C dans une machine PCR à 1 ° C/minute incréments de 0,1 ° C

Remarques importantes

• Il était important d’ajouter le MgCl modifié en raison des interactions entre les cations et l’ADN
• Il était important chauffer le haut du thermocycleur à 105 ° C pour éviter les gradiants de température dans le système. Si la température du fond du thermocycleur est élevé et la température du haut de la basse, le système va s’évaporer sur le fond et les sels seront plaque hors de la solution, conduisant à une substance cristalline blanche indésirable, apparaissant sur le fond du tube

Méthodes alternatives non testés

Alors que nous avons utilisé un standard thermocycleur, il y a plusieurs autres façons que vous pourriez faire l’étape de recuit. On serait d’assembler votre propre et utiliser, en tenant compte de la note de chauffage ci-dessus pour s’assurer que vous n’obtenez pas évaporation. Ou bien, c’est sans doute possible de rassembler tout l’origami par hybridation de l’ADN dans l’eau chaude ! Mélanger l’ADN et les produits chimiques kit tel que décrit ci-dessus, mais au lieu d’utiliser un thermocycleur de recuire l’ADN, faire bouillir l’eau (100 ° C) et ajouter les tubes. Assurez-vous qu’ils sont complètement immergés et éteignez la chaleur sur la cuisinière. Laisser l’eau refroidir avec les tubes submergés. Cela devrait imiter le processus de cyclage thermique, mais il sera moins précis sur la rampe de température exacte.