Étape 7: Inoculation II (Agar Tissue Culture transfert)
Une autre méthode pour ensemencer votre grain, est tout d’abord le tissu champignons sur gélose de multiplication (ou clonage). Mesurer à 5,75 grammes de poudre de gélose nutritive pour 1 tasse d’eau propre (ample pour plats de Pétri de 5 ou plus). Commence à chauffer et remuer jusqu'à dissolution complète de la gélose. Comme il commence à bouillir, continuer à remuer pendant une minute et puis retirer du feu. Versez une fine couche dans vos boîtes de Pétri et couverture avec des couvercles. Envelopper dans du papier aluminium et faites cuire avec votre grain (ou au moins 30 minutes à 15 lb/po2) la pression. Déplacez vos boîtes de Pétri, tissu champignons et autres équipements pour la salle blanche. Laissez les boîtes de Pétri refroidir complètement. Vaporiser les murs de la salle blanche, des bancs et des planchers avec eau de Javel 5 % solution (comme avant usure nettoyer vêtements, se laver les mains, etc.). Un banc et hepa filtre à flux laminaire permettrait de réduire la contamination au cours de cette étape, mais il est possible (avec un taux plus élevé de contamination) réussir sans un.
Prenez le champignon de sa base, soigneusement cracher en deux. Placer le champignon (extérieur vers le bas) sur une surface propre, en veillant à ce que vous gardez l’intérieur des tissus de toucher quoi que ce soit. Stérilisez la lame de bistouri Swann-Morton en le tenant dans la flamme de la lampe à alcool. Soulevez le couvercle de la boîte de Pétri et refroidir la lame de bistouri Swann-Morton en le plaçant au centre dans votre agar. Avec le scalpel, découpez soigneusement un petit carré du tissu champignon nouvellement exposé. Placer le carré de tissu au centre dans l’agar et le couvercle de la boîte de Pétri. Vous pouvez le couvercle de bande (avec une bande de propreté respirante) afin de réduire les risques de contamination. Répétez l’opération, en veillant à stériliser le scalpel avant chaque transfert. Laissez les boîtes de Pétri pour l’incubation.
Incuber de pleurotus ostreatus à 24° C (75° F) et de pleurotus pulmonarius (été) 24° C à 30° C (75° F à 85° F). La colonisation devrait prendre environ 8 à 10 jours.
Pendant ce temps, retirez tout Pétri qui semblent être contaminées par les autres moules. Une fois entièrement colonisé (mycélium approchant les bords), il est temps de transférer l’agar au grain stérilisé. Choisissez uniquement les cultures plus saines pour les vaccins. Stériliser la lame de bistouri Swann-Morton, retirez le couvercle de la boîte de Pétri et couper les 2 coins du centre du plat. Retirez le papier aluminium et le couvercle de la Jarre de grain. Avec le scalpel, transférer les cales au grain stérile. Rapidement, pousser une petite quantité d’ouate trou de respiration du couvercle et le fixer sur le pot. Enfin, secouer le bocal vigoureusement pour disperser le mycélium de la gélose dans tout le grain. Placer sur un plateau ombragé dans la salle blanche pour l’incubation (températures comme indiqué ci-dessus). Répétez pour chaque pot de grain stérilisé.
Remarque : clonage à plusieurs reprises (sans introduire de nouvelles souches) peut de plomb pour reproduire la lumière avec les cultures ultérieures éventuellement perdre vitalité et donc produire moins champignons. Contrairement au clonage, spores quand ont germé (voir étape 8 b), créer des variétées différentes qui sont en concurrence entre eux. Les caractéristiques des champignons qui en résulte peuvent donc varier d’une culture à.