Étape 1: Renseignements sur la PCR
PCR se compose de 3 étapes qui sont parcourus maintes et maintes fois :
Dénaturation (~ 94) à cette étape, l’ADN « pauses dehors », se fendant d’une double hélice en simples brins
Recuit de liaison des amorces (~ 60 ° C) à l’ADN simple brin
Extension (~ 72) polymérase complimente l’ADN, synthèse des brins qui sont de l’ordre de cible
Chacune de ces phases peut être 20-30 secondes longues et répétées 30 + fois, selon le protocole. La plupart des protocoles indiquent également avoir une étape de dénaturation initiale plus longue et une plus longue étape ultime prorogation.
Un tutoriel simple :
http://www.dnalc.org/resources/animations/PCR.html
Il y a aussi un tas de ressources connexes ici : http://www.lab-manual.com/lm_209.htm
Les résultats de PCR peuvent être visualisées à l’aide de l’électrophorèse sur gel. Des échantillons d’ADN sont chargés dans un gel, et une tension élevée est appliquée à travers elle. Parce que l’ADN est chargé négativement, il voyagera à travers le gel à des vitesses différentes en fonction de sa taille. Ce processus sera effectivement séparer les morceaux que vous voulez, et vous pouvez les voir par le gel de coloration. Voici un bon tutoriel , et si vous essayez de bricolage il, le Projet de Macgyver est une très bonne ressource.
PCR peut être effectuée à l’aide de 3 bains d’eau (chacun gardé dans l’un des trois températures de consigne). Un être humain pouvait déplacer physiquement les échantillons d’un bain à l’autre 30 + fois. Machines PCR ont été conçus pour automatiser le processus, mais la plupart ceux de qualité coûte des milliers de dollars. Mais il ne faut pas ! Aujourd'hui il y a un nombre croissant de projets PCR open source, parmi lesquels OpenPCR (600$), LavaAmp (200$) et la PCR de tasse de café (350$).
